728x90 전체 글61 대장균 형질전환 실험 방법 (E.coli Transformation) - DH5α/CaCl2 methods 기준입니다. 플라스미드(plasmid) 를 이용한 대장균의 형질전환 (E. coli Transformation) 플라스미드(plasmid)는 세균 내 유전자 DNA 조각입니다. 이 작은 조각들이 세포 안에서 복제되어 증식하게 되면 생명체처럼 행동하기 시작하는데 이를 형질전환(transformation)이라고 합니다. 플라스미드(plasmid)는 대장균에 외부 유전자를 삽입하기 위해 가장 많이 사용되는 방법 중 하나입니다. 플라스미드를 이용하여 대장균에 유전자를 삽입함으로써 다음과 같은 분자생물학적 의의를 갖습니다. 대장균 내 유전자 삽입 기술은 생명공학 분야에서 중요한 의미를 가지며, 연구 분야에 있어서 매우 유용하게 사용됩니다. 1. 외부 유전자의 대장균 내 전파 - 플라스미드를 이용하여 외부 유전자를 대장균으로 .. 2023. 5. 22. Two-color ImmunoCytoChemistry staining (2 color- ICC 염색)- Rapid/simple methods 입니다. ICC staining 이란? 일반적으로 ICC 염색 (ImmunoCytoChemistry Staining)을 수행하는 목적은 세가지 입니다. 첫번째는 타겟 단백질의 세포내 위치 확인하기 위해서, 두번째는 발현시킨 외부유전자의 발현을 확인하기 위해서, 마지막으로 "세번째는 2가지 이상의 단백질의 상호간 관련성 (interaction)을 확인 및 검증"하는 것입니다. 물론, 한꺼번에 모두 확인할 수도 있습니다. 대부분의 실험은 부착세포에서 세포내 / 핵 단백질을 염색하는 방법 입니다 (링크 참조). 그리고, 세포의 상태와 염색하고자 하는 단백질의 세포내 위치에따라 현탁액에서 고정되지 않은 세포에 표면 단백질 염색방법 (FACS 적용가능) (링크참조) 과 부착 또는 부유 세포의 표면 항원의 형광 염색방법 (.. 2023. 5. 19. QIAGEN plasmid midi-prep. kits 사용, 실험 방법 요약입니다. 플라스미드(Plasmid) DNA Midi-prep. Kits 란? 플라스미드 DNA를 이용하기 위해서는 박테리아 (E. coli) 에서 분리 정제하는 과정이 필요합니다만, 일반적으로 plasmid recombinant 를 위한 cloning 과정에서는 mini-prep 을 많이 사용하게 되지만, 세포나 박테리아에 형질 전환(transduction) 또는 형질도입(transformation) 등으로 발현 세포주 (stable cell line) 제작을 위해서는 대용량 및 고순도의 plasmid DNA (vector) 가 필요합니다. 따라서, 이러한 과정을 용이하게 하기 위해 대량의 E. coli 배양 산물 (50~100 ml)에서 plasmid DNA preperation (Prep.) 혹은 purifi.. 2023. 5. 2. Plasmid DNA mini-prep.(purification) - 전용 Kits 사용 방법 요약 플라스미드(Plasmid) DNA prep. Kits 란? 플라스미드 DNA를 이용하기 위해서는 박테리아 (E. coli) 에서 분리 정제하는 과정이 필요하고, 이러한 과정을 plasmid DNA preperation (Prep.) 혹은 purification 이라고 하며, 이를 위한 prep. Kits 를 국내외 다양한 회사(promega, invitrogen, Qiagen, GeneAll, CosmoGenetech 등)에서 판매하고 있으며, 상세한 방법은 각 제품마다 조금 차이가 있지만 전반적인 방법에 대해 소개하고자 합니다. 플라스미드 DNA는 박테리아 및 일부 다른 유기체의 염색체 DNA와 분리된 일종의 원형 이중 가닥 DNA 분자입니다. 염색체 DNA와 독립적으로 복제할 수 있는 플라스미드 DN.. 2023. 5. 2. Plasmid DNA preperation(purification) - 플라스미드 DNA 정제 방법 (manually methods) 플라스미드(Plasmid) DNA 란? 플라스미드 DNA는 박테리아 및 일부 다른 유기체의 염색체 DNA와 분리된 일종의 원형 이중 가닥 DNA 분자입니다. 플라스미드는 일반적으로 크기가 몇 킬로베이스에서 수백 킬로베이스로 작으며 염색체 DNA와 독립적으로 복제할 수 있습니다. 전반적으로 플라스미드 DNA는 유전 연구 및 생명 공학에 중요한 도구이며 박테리아에서 자연적으로 발생하는 것은 항생제 내성의 확산과 미생물 군집의 진화에 중요한 의미가 있습니다. 인공적으로 제작된 플라스미드를 흔히 vector 또는 DNA vector 라고 표현하기도 합니다. 이러한 플라스미드의 특징을 이용하여 특정 유전자를 플라스미드에 삽입할 수 있으며 (이를 vector 라 표현함), 이를 박테리아 세포에 도입하여 원하는 유전.. 2023. 5. 2. Cell viability (세포 생존율) 측정 방법 - MTT assay 실험 방법으로 확인 해 봅시다. MTT assay 의 원리 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 는 정상적으로 살아있는 혹은 증식하는 세포(대사과정이 온전한 세포)에서는 미토콘드리아의 탈수소 효소작용에 의해 수용성의 노란색 MTT 를 비수용성의 MTT formazan (자주색)으로 환원시키게 됩니다. 비수용성인 MTT foramazan을 DMSO 또는 DMF 에 용해시켜 흡광도를 측정할때 파장은 540 nm이며, 측정된 흡광도가 높을 수록 살아있고 대사적으로 왕성한 세포임을 나타냅니다. 장점 : 1) sensitive, 2) accurate, 3) safety, 4) easy & rapid, 5) semiautomatic 등이 있습니다. ※ 1. MTT .. 2023. 4. 26. 이전 1 2 3 4 5 6 ··· 11 다음 728x90
